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屠宰場非洲豬瘟檢測PCR實驗室建造設(shè)計指南

發(fā)布時間:2019-10-10 閱讀:268

關(guān)于豬瘟檢測實驗室的建造問題你了解多少呢?以下是屠宰場非洲豬瘟檢測PCR實驗室建造設(shè)計指南,希望能夠?qū)Υ蠹矣兴鶐椭?/span>

一、什么是 PCR 實驗室 
PCR 是聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。聚合酶鏈式反應(yīng)也可以 當作一項其重要的酶促合成 DNA 技術(shù)。PCR 又稱為無細胞克隆系統(tǒng)或特異性 DNA 序列體外引物定向酶促擴增法,是基因擴增技術(shù)的一次重大革新,它可將微量的靶 DNA 特異地擴增 上百萬倍。
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是在 DNA 聚合酶催化下,以母鏈 DNA 為模板以特定引物為延伸起
點,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復(fù)制出與母鏈模板 DNA 互補的子鏈 DNA 的過程。是 一項 DNA 體外合成放大技術(shù),能快速特異地在體外擴增任何目的 DNA。可用于基因分離克隆,序列分析,基因表達調(diào)控,基因多態(tài)性研究等許多方面。
一對合成 DNA 的引物經(jīng)過高溫變性、低溫退火和中溫延伸三個階段為一個循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過 30 次循環(huán),終使基因放大了數(shù)百萬倍; 將擴增產(chǎn)物進行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色,在紫外燈照射下肉眼能見到擴增特異區(qū)段的 DNA 帶。

二、實驗室設(shè)計原則
1、非洲豬瘟檢測實驗室的選址:
符合檢測實驗室的相關(guān)規(guī)定,具體適用于屠宰場來說,可選擇辦公樓或者的實驗室空間,選址不能和屠宰線相通,如果實驗室陽性對照污染,會污染整個屠宰生產(chǎn)線,勢必對屠宰場造成巨大的經(jīng)濟損失。
個別不專業(yè)的實驗室設(shè)計建造公司因為不了解非洲豬瘟檢測實驗室的檢測流程,造成設(shè)計布局不合理,對后期開展工作造成很大的不便及生物安全隱患。
2、主體結(jié)構(gòu): 
目前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金R50內(nèi)角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
3、標準的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié): 
將 PCR 過程分成試劑準備、標本制備和 PCR 擴增區(qū)及產(chǎn)物分析檢測區(qū)四個的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié), 使整個 PCR 實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。 
另外: 
PCR 實驗室根據(jù)使用儀器的功能合理設(shè)置各個工作區(qū)域,如采用聚合酶聯(lián)反應(yīng):則設(shè)置試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,這是
常用的分區(qū)方式。樣品需要粉碎處理的,還需增設(shè)樣品粉碎區(qū);若使用實時熒光 PCR 法:基因擴增區(qū)、基因產(chǎn)物分析區(qū)可以合并在一個房間內(nèi);采用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化 PCR 分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域,因此 PCR 實驗室原則上設(shè)置五個區(qū)或四個區(qū)或三個區(qū)或二個單獨的工作區(qū)。
核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)可設(shè)在一個房間內(nèi),但必須在滿足下列要求的前提下:
a. 核酸擴增前區(qū)實驗室內(nèi)設(shè)置兩個不同位置的實驗區(qū),試劑配置在超凈工作臺中操作,樣品處理在生物安全柜內(nèi)操作。
b. 在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統(tǒng),如實時熒光 PCR 儀等。
c. 每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
d. 在實驗前后對操作區(qū)域和共享器具進行清潔及消毒。
e. 各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用,不得交叉使用。
4、非洲豬瘟檢測實驗室的布局:
非洲豬瘟檢測實驗室用的儀器為熒光定量PCR,因此核酸擴增和分析在一個區(qū),實驗室設(shè)計需要如下功能房間:PCR緩存走廊、帶緩存間的配液室、帶緩存間的樣品處理室、帶緩存間的核酸擴增分析區(qū)及實驗室用具消毒室。
5、非洲豬瘟檢測實驗室生物安全保護:
理論上講非洲豬瘟檢測實驗室是BSL-2 生物安全實驗室,需要配置二級生物安全柜,推薦選擇70%外排,30%內(nèi)循環(huán),各功能房間緩存設(shè)置衣柜和消毒器,各區(qū)的實驗服專用,物料流通需要配置帶紫外線的互鎖的傳遞窗,實行人流物流分開設(shè)置。
6、非洲豬瘟檢測實驗室消毒: 
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
7、非洲豬瘟檢測實驗室機械連鎖不銹鋼傳遞窗: 
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
8、非洲豬瘟檢測實驗室地面
地面建議使用 PVC 卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少 800mm×800mm)接縫需要小于 2mm。
9、非洲豬瘟檢測實驗室照明 
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。

三、空氣流與壓差要求
PCR 實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。風速流向不得混亂。
為了保證房間內(nèi)的壓差和避免污染,應(yīng)在空調(diào)面板處寫清楚送風機和排風機的開啟順序和關(guān)閉順序,先后順序不得混亂。
空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于 5 帕,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于 10 帕,應(yīng)配備監(jiān)測靜壓差的設(shè)備,并定期監(jiān)控。
一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;可以通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。
在理想情況下,PCR 實驗室緩沖間內(nèi),可設(shè)置正壓,使室內(nèi)空氣不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi)。PCR 實驗室進風由原有中央空調(diào)控制的要求將中央空調(diào)風口安裝到定點。

四、實驗室設(shè)施要求:
實驗室基礎(chǔ)設(shè)施設(shè)計:包括實驗室基礎(chǔ)裝修、實驗室凈化工程、實驗室供排水工程、實驗室電路系統(tǒng)。
1、實驗室基礎(chǔ)裝修需要潔凈天花、地板、隔斷,合理設(shè)置緩存間及配置凈化門、觀察窗、傳遞窗等。
2、實驗室凈化工程 實驗室應(yīng)配備單獨送排風設(shè)施,試劑配置區(qū)、核酸提取區(qū)和擴增分析區(qū)應(yīng)配備凈化系統(tǒng)。
3、實驗室供排水工程包括非手動水龍頭、不銹鋼或PP水池和緊急淋浴器及供排水管線管路。
4、實驗室電路系統(tǒng):根據(jù)儀器的功率配置合適的功率,特別注意高壓滅菌鍋的功率,注意實驗室用電安全。
5、配備適用的應(yīng)急器材,如應(yīng)急照明設(shè)備、消防器材、意外事故處理器材等。

五、實驗室儀器及設(shè)備
1、衣室儀器及設(shè)備:衣柜或掛衣架、鞋柜以及消毒器和烘干器。
2、配液室儀器及設(shè)備:超凈工作臺、冰箱、小型離心機、旋渦振蕩器、微量移液器等。
3、樣品處理室儀器及設(shè)備:離心機、組織研磨機、Ⅱ級生物安全柜、恒溫水浴鍋、冰柜等、可移動紫外消毒器。
4、核酸提取室儀器及設(shè)備:核酸提取儀、Ⅱ級生物安全柜、恒溫水浴鍋、小型離心機、微量移液器、可移動紫外消毒器等。
5、擴增分析區(qū)儀器及設(shè)備:熒光定量pcr儀、電腦、打印機、不間斷電源、可移動紫外消毒器等。
6、消毒洗滌室:高壓滅菌器、干燥箱、器皿柜等。

六、實驗室面積及設(shè)備間距 
一般來說各房間的面積沒有嚴格要求,只需能放置所需儀器設(shè)備,并且便于人員操作即可,但是有生物安全柜的房間面積不能小于10平米,并且每增加一臺生物安全柜,房間就要增加 10 平米。各實驗室緩沖間的面積一般為 1300*(1300 或 1500)mm 為宜,并且緩沖間的面積不能 大于實驗室房間面積的 1/8。
在做平面設(shè)計的時候,先要考慮的因素是就是“安全”,實驗室是易發(fā)生爆炸、火災(zāi)、毒氣泄露等的場所。我們在做平面設(shè)計的時候,應(yīng)盡量地要保持實驗室的通風流暢、逃生通道暢通。根據(jù)人體工程學的標準。我們做如下的劃分以供參照:
實驗臺與實驗臺通道劃分標準(通道間隔用 L 表示)
L>500mm 時,一邊可站人操作;
L>800mm 時,一邊可坐人操作;
L>1200mm 時,一邊可坐人,一邊可站人,中間不可過人;
L>1500mm 時,兩邊可坐人,中間可過人;
L>1800mm 時,兩邊可坐人,中間可過人可過儀器
天平臺、儀器臺不宜離墻太近,離墻 400mm 為宜。為了在工作發(fā)生危險時易于疏散,實驗臺間的過道應(yīng)全部通向走廊。另:實驗室建筑層高宜為 3.7 米-4.0 米為宜,凈高宜為2.7米-2.8 米,有潔凈度、壓力梯度、恒溫恒濕等特殊要求的實驗室凈高宜為 2.5 米-2.7 米(不包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜為 2.5 米-3.0 米.普通實驗室雙門寬以 1.1 米-1.5 米(不對稱對開門)為宜,單門寬以 0.8 米-0.9 米為宜。

七、潔凈裝修要求
潔凈室(區(qū))的內(nèi)表面應(yīng)平整光滑、無裂縫、接口嚴密、無顆粒物脫落,并能耐受清洗
和消毒,墻壁與地面的交界處宜成弧形或采取其他措施,以減少灰塵積聚和便于清潔。
潔凈室(區(qū))內(nèi)各種管道、燈具、風口以及其他公用設(shè)施,在設(shè)計和安裝時應(yīng)考慮使用中
避免出現(xiàn)不易清潔的部位。
潔凈室(區(qū))的窗戶、天棚及進入室內(nèi)的管道、風口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應(yīng)
密封。

八、人流路徑與物流路徑 
進入實驗室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:
公共清潔區(qū)——衣間(換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區(qū)
工作人員退出實驗室的路徑為:
污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間(有條件的可設(shè)置)——衣間——公共清潔區(qū)
所有的物品進入實驗區(qū)必須經(jīng)過雙扉互鎖傳遞窗,利用傳遞窗消毒后才可進入,實驗室
內(nèi)所有物品的也必須經(jīng)過傳遞窗才可以傳遞到實驗室以外的清潔公共區(qū)。
門的開啟方向
實驗室建筑層高宜為 3.7 米-4.0 米為宜,PCR 實驗室凈高宜為 2.5 米-2.7 米(不包括吊頂);實驗室走廊凈寬宜為 2.5 米-3.0 米.普通實驗室雙門寬以 1.1 米-1.5 米(不對稱對開門)為宜,單門寬以 0.8 米-0.9 米為宜。
一般實驗室門主要向里開,但如有危險的房間,房門應(yīng)朝外開,房門材質(zhì)好選擇壓力
玻璃。
有壓差梯度的房間,門的開啟方向應(yīng)朝向正壓方向一側(cè)開啟;
考慮到消防安全,對于那些主要逃生門的開啟方向應(yīng)朝向清潔區(qū)方向開啟。

九、工作服要求
在凈化車間內(nèi)工作的人員應(yīng)穿著符合要求的工作服。工作服的選材、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適應(yīng),并不得混用。潔凈工作服的質(zhì)地應(yīng)光滑、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì)。無菌工作服必須包蓋全部毛發(fā)、胡須及腳部,并能阻留人體脫落物。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應(yīng)當分別清洗、整理,必要時消毒或滅菌。工作服洗滌、滅菌時不應(yīng)帶入附加的顆粒物質(zhì)。工作服應(yīng)制定清洗周期。
進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,不得將工作服帶出。
實驗室應(yīng)建立、執(zhí)行人員進出潔凈區(qū)的清潔程序和管理制度,人員清潔程序合理。

十、人員培訓(xùn)
配備至少兩名專業(yè)實驗員,能夠處理樣品、提取核酸及核酸擴增,熟練掌握超凈工作臺、生物安全柜、自動提取儀、實時熒光定量PCR的使用,加強生物安全方面的培訓(xùn),避免實驗室污染。







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